細(xì)胞培養(yǎng)基既是培養(yǎng)細(xì)胞中供給細(xì)胞營養(yǎng)和促使細(xì)胞生殖增殖的基礎(chǔ)物質(zhì),也是培養(yǎng)細(xì)胞生長和繁殖的生存環(huán)境。
細(xì)胞培養(yǎng)基的操作規(guī)程:
一、復(fù)蘇
1.把凍存管從液氮中取出來,當(dāng)即投入37℃水浴鍋中,輕微搖晃。液體都融化后(大約1-1.5分鐘),拿出來噴點酒精放到超凈工作臺里。
2.把上述細(xì)胞懸液吸到裝10ml培育基的15ml的離心管中(用培育基把凍存管洗一遍,把粘在壁上的細(xì)胞都洗下來),1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。
3.把上清液倒掉,加1ml培育基把細(xì)胞懸浮起來。吸到裝有10ml培育基的10cm培育皿中前后左右輕輕搖晃,使培育皿中的細(xì)胞均勻分布。
4.標(biāo)好細(xì)胞品種和日期、培育人姓名等,放到CO2培育箱中培育,細(xì)胞貼壁后換培育基。
5.3天換一次培育基。
二、傳代
1.培育皿中的細(xì)胞覆蓋率到達(dá)80%-90%時要傳代。
2.把原有培育基吸掉。
3.加恰當(dāng)?shù)囊鹊鞍酌?能覆蓋細(xì)胞就行),消化1-2分鐘。
4.細(xì)胞都變圓后加如入等體積的含血清的培育基終止消化。
5.用移液槍吹打細(xì)胞,把細(xì)胞都懸浮起來。
6.把細(xì)胞吸到15ml的離心管中,1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。
7.倒掉上清液,加1-2ml培育基,把細(xì)胞都吹起來。
8.依據(jù)細(xì)胞品種把細(xì)胞傳到幾個培育皿中。一般,癌細(xì)胞分5個,正常細(xì)胞傳3個,繼續(xù)培育。
三、凍存
把細(xì)胞消化下來并離心(同上)。用配好的凍存液把細(xì)胞懸浮起來,分裝到滅菌的凍存管中,中止幾分鐘,寫明細(xì)胞品種,凍存日期4℃30min,-20℃30min,-80℃過夜,然后放到液氮灌中保存。
以上為您介紹的是細(xì)胞培養(yǎng)基的操作規(guī)程,以上知識希望對您有所幫助!