流式細胞儀的操作步驟和使用注意事項

更新時間：2022-12-10

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　　流式細胞儀是儀器設備中的生物器械，屬于分子生物范疇。流式細胞儀已廣泛應用于：免疫學、生物化學、生物學、腫瘤學以及血液學等方面的研究和臨床常規(guī)工作。具體的說，（1）免疫學用于：研究細胞周期或DNA倍體與細胞表面受體及抗原表達的關(guān)系；進行免疫活性細胞的分型與純化；分析淋巴細胞亞群與疾病的關(guān)系；免疫缺陷病如艾滋病的診斷；器官移植后的免疫學監(jiān)測等。（2）生物學中的。

　　流式細胞儀是以流式細胞術(shù)為核心技術(shù)，集光學、電子學、流體力學、細胞化學、生物學、免疫學以及激光和計算機等多門學科和技術(shù)于一體的先進科學技術(shù)設備。是現(xiàn)代科學研究中的先進儀器之一，被譽為實驗室的”CT”。流式細胞儀主要由液流系統(tǒng)、光路系統(tǒng)、檢測分析系統(tǒng)三部分組成。部分儀器在電子系統(tǒng)中具有分選功能，通過對粒子進行充電和偏轉(zhuǎn)，達到對細胞的分選并分析的目的。

　　操作步驟：

　　1. 單細胞懸液的制備：將1x105~1x107的細胞放入1.5 m l離心管中3000 r/min 離心5分鐘，棄上清；加入FACS緩沖液100 ul 懸浮細胞。

　　2. 封閉細胞表面Fc受體：在步驟1中加入Fc受體抗體0.5 ul（0.5 mg/ml），水浴3分鐘。

　　3. 細胞與熒光抗體結(jié)合：在步驟2中加入熒光抗體1 ul（0.5 mg/ml），水浴30分鐘。

　　4. 洗細胞去除游離的熒光抗體：在步驟3中加入FACS緩沖液350 ul，輕輕混勻，3000 r/min，離心5分鐘，棄上清，重復步驟（4）2次。

　　5. 上樣前處理：取100 ul 儀器緩沖液加入步驟（4）獲得的細胞沉淀中，輕輕混勻懸浮細胞，將細胞懸液移入FACS專用管中，準備進行儀器檢測和分析。

　　注意事項

　　1. 減少非特異熒光染色

　?。?）細胞的活性和狀態(tài)：流式細胞儀不但可探測細胞表面的熒光，也可探測細胞內(nèi)的熒光。因此，如果要檢測細胞表面的分子，一定要保證細胞的活性，還應盡可能保持細胞靜止，通常在4度進行操作。否則，熒光抗體進入死細胞內(nèi)，會產(chǎn)生非特異結(jié)果。

　?。?）封閉抗體的應用是bi不可少的，因為大多數(shù)的免疫細胞表面都表達有Fc-R。細胞與抗體相互作用后，一定要用FACS緩沖液洗2~3次，以除去游離的抗體。

　　2. 單染色時以FCS常用，F(xiàn)ITC標記抗體熒光比較穩(wěn)定而且價格合適。

　　3. 如果同時要檢測兩種以上的分子，一定要選擇不同波長的熒光所標記的抗體。