晶欣 重組人纖粘連蛋白片段GX100B 轉染  產(chǎn)品貨號：GX100B 

產(chǎn)品組分：重組人纖粘連蛋白 2.5mg，該試劑以1 mg/ml 溶液形式提供。【含有12.5 mM檸檬酸鈉(pH 6.2)和1.25%蔗糖的無菌溶液。】

儲存條件：-20℃

注意：（1）最多可凍融10次。

          （2）不要劇烈混合溶液。不要渦旋。

產(chǎn)品介紹：

該重組人纖維連接片段（rFN-CH-296），由三個功能結構域組成：細胞結合域 、肝磷脂結合域和CS1位點。該片段通過協(xié)助靶細胞和病毒粒子的共定位來增強逆轉錄病毒介導的基因轉導。其作用原理是：逆轉錄病毒載體與肝磷脂結合域結合，細胞表面VLA-5及 VLA-4分別與該纖連蛋白的細胞結合域 和 CS-1位點結合。

在經(jīng)重組人纖粘連蛋白片段包被的培養(yǎng)容器表面，細胞與病毒載體高濃度共存，從而提高基因感染效率。

感染方案：

1.逆轉錄病毒與該重組人纖粘連蛋白片段包被的培養(yǎng)板結合，去除逆轉錄病毒上清液后加入靶細胞。但去除上清液會減少抑制性分子(例如，從生產(chǎn)細胞分泌的分子，如蛋白聚糖、病毒包膜蛋白)，從而降低病毒介導的基因轉導效率。

2.細胞與病毒上清液混合并結合到重組人纖粘連蛋白片段包被的培養(yǎng)板上。

兩種方案均可用于有效的基因轉導。盡管方案1廣泛適用，但具體實驗方案可能仍需根據(jù)靶細胞、載體、靶基因進行修改。

需要準備設備：

未經(jīng)處理的組織培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿

電動移液器

移液器

無菌移液器

帶濾芯的無菌吸頭

生物安全柜或超凈工作站

顯微鏡

二氧化碳培養(yǎng)箱

孔板離心機

試劑：

無菌PBS(-)

 HBSS/Hepes (Hank's Balanced Salt溶液，添加2.5% (v/v)1 M Hepes)

 2%牛血清白蛋白(BSA Fraction V) /PBS 溶液

晶欣 重組人纖粘連蛋白片段GX100B 轉染  產(chǎn)品貨號：GX100B 

實驗方案：

1. 重組人纖粘連蛋白片段包被培養(yǎng)板的制備

將重組人纖粘連蛋白片段包被于培養(yǎng)板上，濃度20-100μg/ml的重組人纖粘連蛋白片段可達到4-20μg/cm²的包被密度。

（1）包被前，用無菌PBS將該溶液稀釋至20-100μg/ml?！菊?zhí)崆坝嬎阒亟M人纖粘連蛋白試劑的用量，如：2.25ml濃度為20μg/ml的重組人纖粘連蛋白溶液放入直徑為35mm的培養(yǎng)皿（9cm²）中時，用于包被的密度為5μg/cm²】

注意：為避免重組人纖粘連蛋白片段丟失，請勿將PBS稀釋的重組人纖粘連蛋白溶液過濾除菌。

（2）將適當體積（24孔板中每孔0.5 ml，或6孔板每孔2 ml。）的無菌重組人纖粘連蛋白溶液分配到每個板中，讓板在室溫下靜置2小時或在4℃過夜。

注意:在此步驟中應使用未經(jīng)處理的細胞培養(yǎng)級組織培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿。

（3）移除重組人纖粘連蛋白溶液，然后用適量含無菌2%牛血清白蛋白(BSA，Fraction V)的PBS溶液進行封閉（24孔板中每孔0.5 ml，或6孔板每孔2 ml），讓板在室溫下靜置30分鐘。

（4）移除BSA溶液，用適當體積的HBSS/Hepes或PBS清洗一次。除去洗滌液后，即可使用。重組人纖粘連蛋白片段包被板可用封板膜密封，并在4℃下儲存—周。

2.基因轉導

使用重組人纖粘連蛋白試劑進行基因轉導的方法有兩種:重組人纖粘連蛋白結合病毒感染法(A方法)和上清液感染法(B方法)。在A方法中，逆轉錄病毒顆粒首先結合到涂有重組人纖粘連蛋白試劑的板上，去除病毒上清液后加入靶細胞。在B方法中，將病毒溶液和靶細胞混合，然后添加到重組人纖粘連蛋白片段包被板中。

如果病毒溶液未經(jīng)純化直接用于病毒感染，可能會因為污染導致基因轉導效率降低。在這種情況下，推薦使用A方法，通過將病毒與重組人纖粘連蛋白試劑結合并去除上清液來去除抑制物。

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